里程碑!我國首個《CAR-T細胞制劑制備質量管理規范》征求意見稿發布!

2018-05-02 00:00:00 416

康愛生物|免疫細胞|免疫檢測|CAR-T技術|細胞|生物技術|干細胞



中國醫藥生物技術協會發布


目次

前言II

引言III

1 范圍1

2 術語和定義1

3 基本要求2

3.1 基本原則2

3.2 人員的要求2

3.3 場所和設施2

3.4 物料2

4 載體制備3

4.1 質粒制備3

4.2 非病毒載體制備的基本要求3

4.3 病毒載體制備的基本要求3

5 細胞制備過程中的要求3

5.1 樣本的要求3

5.2T細胞的采集和分離4

5.3 操作的要求4

5.4 細胞轉導及擴增的要求4

5.5 安全性及有效性檢測5

5.6CAR-T細胞制劑的質量要求5

5.7CAR-T細胞凍存、運輸與復蘇的要求5

6CAR-T制劑的質量控制與放行5

7 追溯5

8 保密原則6

9 附則6

參考文獻7

 

前言

本標準按照GB/T 1.12009《標準化工作導則  第1部分:標準的結構和編寫》給出的規則起草。

請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別這些專利的責任。

本標準由中國醫藥生物技術協會制定,由中國醫藥生物技術協會實施。

本標準起草單位:中國醫藥生物技術協會醫藥生物技術臨床應用專業委員會。

本標準主要起草人:。

本標準為首次發布。

 

引言

近年來,免疫治療經歷了一系列突飛猛進的發展,以特異性過繼免疫細胞療法及免疫檢查點抗體療法為代表的新型免疫治療技術因其在臨床研究中取得的顯著療效而成為學術界和產業界共同關注的焦點。其中,嵌合抗原受體T細胞免疫療法(Chimeric Antigen Receptor T-Cell ImmunotherapyCAR-T療法)因其在白血病、淋巴瘤、多發性骨髓瘤的治療中展現出顯著的治療效果而成為國內外研究的熱點。隨著我國對CAR-T技術的研究不斷深入,國內企業的積極布局和產業鏈的延伸,我國的CAR-T細胞治療技術也在緊隨國際趨勢的發展。

然而,目前國內關于CAR-T細胞的制備和質量控制缺乏統一的標準和管理規范,各制備機構或應用機構之間無法進行正常的評估和交流,一定程度上不利于細胞治療產業的專業化發展。只有確立了安全、規范、穩定、可追溯的行業規范,才能從源頭保證整個CAR-T細胞治療產業的規范性和安全性。

為了適應我國CAR-T細胞治療產業的需要,加強CAR-T細胞治療的管理,規范細胞制備過程,保證CAR-T細胞制品在臨床應用的安全性,促進國際間同行的交流,有必要制定中國醫藥生物技術行業的CAR-T細胞制劑制備質量管理規范。


嵌合抗原受體修飾T細胞(CAR-T細胞)

制劑制備質量管理規范


1 范圍

1.1 為協助CAR-T細胞制劑制備機構(以下簡稱機構)在制備過程中避免污染、交叉污染、混淆及差錯,且保證CAR-T細胞制劑的安全性、生物學效應,參照《免疫細胞制劑制備質量管理自律規范》等相關規定和指導原則,制定本規范。

1.2 本規范所稱的CAR-T指用于治療的、經體外基因導入后表達嵌合型抗原受體的人源T細胞,T細胞來源于患者自體或異體外周血淋巴細胞。

1.3 本規范適用于CAR-T細胞制劑制備的所有階段。

2 術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。  

2.1  

嵌合抗原受體T細胞(CAR-T細胞)  Chimeric Antigen Receptor T Cell,CAR-T cell

經過基因工程修飾的,可表達被導入的含有抗原識別片段、T細胞受體活化分子、共刺激信號等信號分子的CAR基因的T細胞。

2.2 

外周血單個核細胞  Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC

血液中具有單個核的細胞,主要包括淋巴細胞,單核細胞,巨噬細胞,樹突狀細胞和少量其他細胞類型。

2.3 

質粒  Plasmid

是一類存在于細菌和真菌細胞中獨立于染色體DNA而自主復制的共價、閉合、環狀DNA分子,是基因工程最常見的運載體。

2.4 

目的基因  Target Gene

人工構建的具有明確功能的基因或基因片段。

2.5 

載體  Vector

在基因工程重組DNA技術中將DNA片段(目的基因)轉移至受體細胞中進行復制和表達的工具。常用的載體包括質粒、慢病毒、逆轉錄病毒等。

2.6 

轉導  Transduction

借助病毒等方法將外源性遺傳物質(DNA或RNA)導入細胞進行穩定表達的過程。

2.7 

凍存液  Cryoprotectant

當與活細胞相結合時,能保護細胞在冷凍和復蘇過程不受損害的溶液或試劑。

2.8 

標識  Label

粘貼或附著在對象上的用于區分不同對象的標記、注釋或條碼。

2.9 

細胞批次  Cell Batch

指取自個體的一次采集的細胞,經生產全過程制成的終末細胞培養物或收獲物。

3 基本要求

3.1 基本原則

CAR-T細胞制劑的制備包括質粒的制備、病毒的制備、樣本的接收和處理、細胞刺激、轉導、擴增、收獲、質量檢測以及凍存、運輸等全過程。對各個操作環節以及環境和人員等都有嚴格的要求以確保最終產品符合標準。

3.2 人員的要求

3.2.1 機構應配備與其規模相適應的專門的CAR-T細胞制劑制備人員和質量檢測人員,操作人員應具備基本的專業知識,并接受特定的專業技術培訓后方可上崗。病毒構建和細胞制備技術人員身體健康無傳染性疾病,能熟練掌握無菌操作技能,并具備GMP級病毒構建或人T細胞培養經驗。

3.2.2 建立人員衛生操作規程和自我防護規程,最大限度地降低人員對細胞制備造成污染以及操作人員自我感染的風險。操作規程應當包括與健康、衛生習慣及人員著裝相關的內容,以及操作過程中避免交叉感染和污物正確處理方法等內容。參觀人員和未經培訓的人員不得進入制備區和質控區。

3.3 場所和設施

3.3.1 CAR-T細胞制劑制備場所分為潔凈區及非潔凈區。潔凈區各功能區包括細胞制備區、細胞儲存區、病毒制備區、病毒儲存區、中控區、部分質控區(無菌檢測室、微生物限度室、陽性對照室、細胞操作室等)等,各個區域相互獨立,病毒制備區、病毒儲存區、陽性對照室應具有獨立的空調系統。非潔凈區包括部分質控區(革蘭氏染色、內毒素測定、流式細胞儀檢測等)、留樣室、辦公室、資料檔案室、物料儲存室、氣體儲存室等,不應與潔凈區交叉過往。機構可根據實際情況合理分配各區。

3.3.2 潔凈區應當根據制備流程及相應的潔凈度級別要求合理設計、布局和使用。潔凈區應以溫濕度、微粒、微生物、壓差為主要控制參數。

3.4 物料

3.4.1 CAR-T細胞制劑制備所用的物料是指制備中所使用的試劑耗材、生物活性分子以及與細胞制劑直接接觸的包裝材料及外包裝材料等。

3.4.2 CAR-T細胞制劑制備所用的樣本及物料應當符合相應的質量標準。進口物料應當符合國家相關的進口管理規定。細胞制劑制備中使用的物料管理應參照《細胞治療產品研究與評價技術指導原則》。

4 載體制備

4.1 質粒制備

4.1.1 質粒應序列信息明確,并得到準確的鑒定和確認。

4.1.2 質粒的質量應經過檢測,包括但不限于:

a) 純度:超螺旋型的含量,細菌基因組DNA、RNA和蛋白殘留量;

b) 無菌試驗;

c) 熱原質試驗;

d) 過敏試驗;

e) 異常毒性試驗;

f) 介導目的基因的活性檢測;

g) 有害物質殘余量的測定。

4.2 非病毒載體制備的基本要求

非病毒載體(包括但不限于DNA、RNA,蛋白質) 應有明確的來源、結構和遺傳特性,制備過程應符合GMP標準,達到相應質量標準的要求。應不含有支原體、細菌及病毒,內毒素等其他外源因子應控制在限定范圍內;根據所選擇載體類型不同,可綜合參考《細胞制品研究與評價技術指導原則》(試行)并分別參考《人基因治療研究和制劑質量控制技術指導原則》、《人用重組DNA制品質量控制技術指導原則》、《人用單克隆抗體質量控制技術指導原則》等相關指導原則開展相關技術研究。

4.3 病毒載體制備的基本要求

4.3.1 病毒包裝所使用的細胞系應有明確來源和批次信息,并有詳細記錄;應不含有支原體、細菌及病毒,內毒素等其他外源因子應控制在限定范圍內;應通過表型或生物化學等方法進行檢測來確保其性質和均一性。

4.3.2 應提供病毒包裝所用細胞系的細胞培養液的詳細成分并應具有溯源性,如使用人或動物源性成分,如血清、胰蛋白酶或其他生物學活性的物質,應具有這些成分的來源、批號、質量控制、檢測結果和質量保證的相關信息,并確保其不含有特定動物源性病毒成分。

4.3.3 每一批用于轉導的病毒應經過檢測,包括但不限于:

鑒別試驗。根據生產過程中引入的風險,進行與其他病毒的交叉檢測,如腺病毒、EBV、CMV、HAV、HBV、HIV、HTLV等;

病毒復制能力(RCR)檢測(生產時的批次和凍存復蘇時的批次);

無菌試驗;

內毒素檢測;

支原體檢測;

殘留量測定:應根據生產工藝及成品的添加成份,對有潛在危險性的成份進行殘留量檢測。如病毒生產工藝中使用牛血清則需檢測牛血清白蛋白殘留量;制劑需檢測總DNA殘留;對于使用轉入SV40基因的293T細胞進行病毒生產的,需檢測SV40序列的殘留等;

病毒滴度測定;

效力試驗:插入基因的蛋白表達水平測定及生物學活性測定。

4.3.4 病毒應進行有效期研究,并在有效期內使用。病毒應儲存于合適的環境中,確保病毒的無菌性以及效價的持久性。

5 細胞制備過程中的要求

5.1 樣本的要求

5.1.1 樣本送達時應附細胞制備申請單,內容包括但不限于:

患者基本信息:姓名、性別、年齡、身份證號等必要信息;

患者的臨床醫學信息:既往史、現病史、臨床診斷、病理診斷、腫瘤特異性靶點信息;

實驗室檢測的結果:血常規及分類、病毒四項檢查(HIV、HCV、HBV、梅毒)、肝腎功能;

治療方案:細胞的種類、治療次數、回輸方式等;

知情同意書。

5.2 T細胞的采集和分離

5.2.1 應在國家衛生部門認可的采血科室,應用全自動血細胞分離機,按單核細胞分離程序,采集外周單個核細胞富集血,或應用合格的醫療器材通過靜脈采取患者外周血。根據制備要求對采集的外周血進行單個核細胞的分離及T細胞的分選,并對所分選出的T細胞進行刺激和活化。

5.2.2 應對患者進行血常規及乙型肝炎病毒(HBV)檢測,乙型肝炎病毒陽性患者的T細胞需在專用細胞處理間進行細胞分離、培養、收集,完成制備過程。

5.2.3 采集管路需使用一次性消耗品,血細胞分離機定期進行清潔和檢測。

5.2.4 在符合潔凈要求的操作間分離PBMC,根據病人情況或實驗要求再進一步確定是否分選特定細胞亞群進行轉導,轉導前進行細胞計數及細胞存活率測定。活化T細胞所采用的刺激抗體或磁珠抗體應符合相關質量要求。

5.2.5 培養過程中對培養基、活性因子等外源蛋白的要求如下:

a) 所有使用的培養基、活性因子等外源蛋白應有明確的來源及批號,應有質量檢定合格報告。

b) CAR-T細胞體外擴增培養應避免使用異種、異體血清或血漿。所有成分應明確并符合無菌、低內毒素的質量標準,制劑中殘留的培養基成分應對回輸者無不良影響。

5.3 操作的要求

5.3.1 CAR-T細胞制劑的制備應當按照經過驗證后批準的操作規程的要求進行,并有相關記錄,以確保CAR-T細胞制劑達到規定的質量標準。

5.3.2 在感染性樣本操作區以及病毒的制備區內,操作人員應當穿戴該區域專用的防護服。

5.3.3 同一個培養箱內不得同時存放兩個不同批次的細胞培養產品,以免混淆造成嚴重后果。應在細胞培養耗材及培養箱上進行標識。

5.3.4 應當建立CAR-T細胞制劑以及病毒的批號編制規程和確定收獲日期的操作規程。收獲日期應明確日期及時間。每批細胞制劑以及病毒均應當編制唯一的批號,并建立細胞制劑以及病毒的出入登記記錄制度。

5.3.5 操作前還應當檢查所領用的包裝材料正確無誤,核對待包裝產品和所用包裝材料的名稱、規格、數量、質量狀態,且與操作規程相符。

5.4 細胞轉導及擴增的要求

5.4.1 細胞轉導主要包括非病毒轉導和病毒轉導2種方式,應確認基因導入系統并對其進行驗證,每一操作步驟必須鑒定其結果,轉導過程及結果應有記錄。

5.4.2 應注意安全操作,轉導過程中所使用的培養皿或培養袋等耗材和細胞因子等均需符合臨床應用標準。

5.4.3 細胞擴增過程中每一步應準確計數并注意細胞濃度調整及培養時間以保證擴增后數量達到臨床要求。

5.5 安全性及有效性檢測

5.5.1 體外試驗:應檢驗該CAR-T細胞目的基因的表達情況,及其對目標抗原陽性腫瘤細胞特異性殺傷作用的情況。

5.5.2 體內試驗:應至少有一批動物實驗結果,證明該CAR-T細胞在動物體內的安全性和有效性。導入的途徑應盡可能接近于臨床試驗的途徑或條件。

5.6 CAR-T細胞制劑的質量要求

5.6.1 應進行無菌試驗和支原體檢測。

5.6.2 應進行內毒素檢測。

5.6.3 如果細胞培養基內添加成分可能會對細胞制劑質量或安全性產生影響,應對培養基及其他添加成分殘余量進行檢測,如細胞因子等。

5.6.4 使用磁珠抗體刺激T細胞的,應檢測細胞中的殘余磁珠量。

5.6.5 應對細胞存活率和回輸數量進行檢測。

5.6.6 應對終產品中CAR-T細胞轉導率、免疫表型進行檢測。

5.6.7 應檢測CAR-T細胞制劑對特異性腫瘤細胞的殺傷作用。如果制備的是異體CAR-T細胞,還應檢測CAR-T細胞對正常細胞的殺傷。

5.6.8 用病毒轉導細胞并對病毒RCR完成檢測之后,應留取部分CAR-T細胞以備將來需要時對RCR的檢測。應進行RCR的長期隨訪檢測。

5.7 CAR-T細胞凍存、運輸與復蘇的要求

5.7.1 CAR-T產品應用之前可先凍存,待質控試驗結束證實結果無問題后再復蘇并進行回輸。

5.7.2 凍存、運輸與復蘇的方法、凍存液以及凍存容器等應經過驗證,保證細胞質量和安全性。

6 CAR-T制劑的質量控制與放行

6.1 機構應具有CAR-T細胞制劑的檢測能力,并配備相關專業技術人員和設備,建立制劑質量控制檢測標準和操作規程,確立制劑質量檢驗和放行的操作規程,所有的檢測方法應經過驗證。對整個制備過程中各個環節的質量控制均符合標準方可進行臨床應用。

6.2 每批次的CAR-T細胞制劑質量標準的檢測項目應至少包括:無菌檢測、支原體檢測、內毒素檢測、外源血清殘留、細胞存活率、細胞數量、細胞表型、效應細胞比率、CAR轉導效率、復制型病毒等,檢測方法參見現行版《中國藥典》生物制品相關規程。

7 追溯

應建立完整的細胞制備過程記錄系統以及標識標簽系統和免疫細胞制劑編碼系統,以確保CAR-T細胞制劑的辨識并防止制劑混雜,確保其唯一性和可追溯性。記錄和標識應當遵循相關法律和規范的要求。細胞制備記錄包括每天的細胞狀況,細胞數量,轉導條件,細胞因子濃度等具體信息。標識系統應記錄患者姓名、 病歷號、病種、細胞制劑名稱、批號、收獲日期及時間、規格(細胞數量/體積)、儲存條件、效期(精確時間)等。每個患者的信息應當雙人復核。每份CAR-T細胞制劑必須編制唯一的編碼,通過它能追溯到患者信息以及該細胞制劑操作和最終處理的所有記錄,并建立相關程序能夠關聯新舊編碼。

8 保密原則

應采取措施,保證病人的隱私信息不被泄露。

9 附則

其他關于免疫細胞制備的要求以及人員、設備、樣品儲存與運輸、標識與追溯系統等細則,參見中國醫藥生物技術協會制定的《免疫細胞制劑制備質量管理自律規范》。

 

參考文獻

[1] 食品藥品監管總局,細胞治療產品研究與評價技術指導原則(試行),2017.

[2] 藥品生產質量管理規范(2010修訂)(衛生部令第79號).

[3] 國家藥典委員會,中華人民共和國藥典,2015.

[4] 中國醫藥生物技術協會免疫細胞制劑制備質量管理自律規范,2016.


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